乳鼠（通常指出生后≤21天的幼鼠）的PK研究对儿科药物研发至关重要，其生理特点（器官发育不成熟、代谢酶活性低）显著影响药物ADME过程。以下是实验关键步骤及注意事项。
乳鼠日龄：根据研究目标选择合适阶段：
新生儿期：P0-P7（模拟人类早产儿）。
哺乳期：P7-P14（器官快速发育期）。
离乳期：P14-P21（代谢酶逐步成熟）。
对照组设置：同龄乳鼠+成年鼠（≥8周）对比，评估发育相关PK差异。
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途径 |
操作要点 |
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口服（PO） |
胃管灌胃（使用柔性导管，剂量≤10 μL/g体重），避免误入气道。 |
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皮下（SC） |
颈背部皮下注射（针头30G，剂量5-10 μL/g）。 |
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静脉（IV） |
尾静脉注射（乳鼠尾部血管细，需预热+专用固定器，仅适用于P14以上个体）。 |
剂量计算：基于体表面积换算（通常乳鼠剂量=成年鼠剂量×2-3倍）。
密集采样法（适用于珍贵样本）：
时间点：给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h（需多组动物，每组1-2个时间点）。
采血量：≤10%总血容量（乳鼠总血量≈7%体重，如10 g乳鼠采血≤70 μL）。
微采样技术：
尾静脉微量采血（5-20 μL/次，使用肝素化毛细管）。
眼眶后静脉丛采血（仅限终点采血，避免重复操作）。
抗凝剂：肝素钠（5-10 IU/mL血液）或EDTA-K2（1-2 mg/mL血液）。
离心条件：4℃，3000×g，10分钟（乳鼠红细胞脆性高，避免过度离心）。
LC-MS/MS：首选方法，灵敏度高（可检测pg/mL级），适用于微量样本。
ELISA：适用于大分子（如抗体、蛋白类药物）。
注意事项：
基质效应：乳鼠血浆蛋白含量低，需优化提取方法（如蛋白沉淀）。
溶血干扰：避免使用溶血样本（游离血红蛋白影响LC-MS信号）。
肝微粒体孵育：离体评估CYP450酶活性（乳鼠肝微粒体需现制现用）。
孵育体系：肝微粒体（0.5 mg/mL）+ NADPH（1 mM）+药物（1-10 μM），37℃孵育30 min。
代谢表型分型：qPCR/WB检测CYP3A4、CYP2D6等发育相关代谢酶表达。
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参数 |
定义 |
乳鼠PK特点 |
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Cmax |
血药浓度峰值 |
因吸收快（皮肤薄、胃排空快），Cmax高于成鼠 |
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Tmax |
达峰时间 |
通常更短（如PO给药Tmax≈15-30 min） |
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AUC0-t |
药时曲线下面积（反映总暴露量） |
AUC可能高于成鼠（清除率低） |
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t1/2 |
消除半衰期 |
延长（肝代谢/肾排泄功能不成熟） |
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CL/F |
表观清除率 |
低于成鼠 |
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Vd/F |
表观分布容积 |
可能更高（体液占比高，脂肪含量低） |
体温维持：乳鼠无法自主保温，实验全程需加热垫（37℃）防止低体温。
母鼠分离：采血或给药时间≤30分钟，避免母鼠拒乳。
营养支持：实验后补充葡萄糖溶液（5%浓度，皮下注射50 μL）。
体重标准化：PK参数需按体重或体表面积校正（乳鼠体重日增10-15%）。
发育阶段关联：不同日龄（如P7 vs P21）的酶活性差异需单独分析。
采血限制：同一乳鼠采血≤3次，总采血量≤15%血容量。
终点标准：出现严重应激（如呼吸急促、活动停滞）需立即安乐死。
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组别 |
Cmax (ng/mL) |
Tmax (h) |
AUC0-24h (h·ng/mL) |
t1/2 (h) |
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成年鼠（50 mg/kg） |
1200 ± 150 |
1.0 |
8500 ± 1000 |
2.5 ± 0.3 |
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乳鼠P7（50 mg/kg） |
2500 ± 300 |
0.5 |
15000 ± 2000 |
4.8 ± 0.6 |
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乳鼠P14（50 mg/kg） |
1800 ± 200 |
0.8 |
11000 ± 1500 |
3.2 ± 0.4 |
